抑菌圈這個名詞主要與藥敏試驗(yàn)有關(guān),是利用待測藥物在瓊脂平板中擴(kuò)散使其周圍的細(xì)菌生長受到抑制而形成透明圈,即抑菌圈。通過抑菌圈大小可以判定待測藥物抑菌效價。
產(chǎn)生抑菌圈的方法主要有紙片擴(kuò)散法(K-B法)、牛津杯法和打孔法三種。以教學(xué)中比較常做實(shí)驗(yàn)的K-B法為例,先了解一下哪些因素會影響試驗(yàn)結(jié)果,再針對性地解決,使得到明顯的抑菌圈。
1.藥敏紙片:紙片選用直徑6.00~6.35mm,吸水量為20ul的專用藥敏紙片。紙片的選擇會影響藥物擴(kuò)散和細(xì)菌生長。含藥紙片一般密封貯存在2~8℃,不超過一周,所以使用前應(yīng)當(dāng)提前從冰箱取出平衡室溫至少10min后再打開,避免因冷凝水影響藥效,影響結(jié)果。
2.菌液:配制菌液的前提是保證菌液的純度,以免混入其他菌;另外濃度的配制一般是選擇麥?zhǔn)媳葷岱?,調(diào)成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏臉?biāo)準(zhǔn)菌液濃度。所以配制濃度時應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格對照,濃度太高或太低對實(shí)驗(yàn)有影響。
3.培養(yǎng)基:選擇水解酪蛋白培養(yǎng)基(M-H),為兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基,一般4℃保存。
以上的材料準(zhǔn)備,如果是學(xué)校的實(shí)驗(yàn)課程,一般有的實(shí)驗(yàn)老師會 直接幫忙準(zhǔn)備好。
4.細(xì)菌接種:用無菌棉拭子蘸取已校正濃度的菌液,在管壁擠掉多余菌液。涂布整個培養(yǎng)基表面,每次將平板旋轉(zhuǎn) 60°,涂抹三次,最后沿周邊擦繞兩圈,以保證菌液涂抹均勻。這樣才能使使抑菌圈顯現(xiàn)明顯,試驗(yàn)結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。
5.貼藥敏片:涂菌后放置15min使平板上的水分被瓊脂完全吸收后,才能貼藥敏紙片。這個時間不能過長,否則會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。
①貼藥敏紙片時,每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口,避免藥敏紙片之間相互混淆,以提高藥敏的準(zhǔn)確性。
②兩紙片之間距離不小于24mm,紙片距平板邊緣不小于15mm,以免得到的抑菌圈交叉或者不完整。
③紙片貼后不可再拿起,放下后輕壓使藥敏紙片貼合在平板上??梢栽谶€未貼之前在培養(yǎng)基底部量好距離,確定好紙片放置位置。
④將平板翻轉(zhuǎn)放置。
6.恒溫箱培養(yǎng):35℃恒溫箱培養(yǎng)18~24小時。放置的時候記得放置平穩(wěn)。
整個流程里面比較會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的就差不多這些了,任何實(shí)驗(yàn)都存在不可控的誤差,只有操作得當(dāng),結(jié)果才能更趨于完美。